miRNA in citofluorimetria: the impossible becomes reality
PrimeFlow assay, l’innovativo sistema di Affymetrix eBioscience che permette di studiare mRNA e proteine a livello di singola cellula  con un’analisi citofluorimetrica e che è ormai una realtà riconosciuta dalle principali riviste scientifiche, aumenta le proprie capacità di indagine.

E’ stato infatti recentemente validato il protocollo per l’utilizzo del PrimeFlow assay nello studio dei miRNA (max 2), sempre in associazione con altri RNA e con proteine.
Con l’aggiunta della coniugazione ai probeset del fluoroforo AlexaFluor 568, è stata inoltre aumentato a 4 il numero di RNA rilevabili contemporaneamente (è condizione necessaria  la disponibilità di un citofluorimetro con laser giallo/verde).

Sempre nell’ottica del miglioramento del pacchetto PrimeFlow, è stato messo a punto un kit base unico per tutte le specie animali includendo in questo anche un kit di compensazione per l’analisi citofluorimetrica (i controlli possono essere acquistati separatamente).

 

  Codice Descirzione
  88-18005 PrimeFlow RNA assay (40 tests / 100 tests)
  88-18006-210 PrimeFlow microRNA pretreatment buffer 100 tests
  VX1-99999 Probeset conjugated to AlexaFluor 647 (40 tests / 100 tests)
  VX4-99999 Probeset conjugated to AlexaFluor 488 (40 tests / 100 tests)
  VX6-99999 Probeset conjugated to AlexaFluor 750 (40 tests / 100 tests)
  VX10-99999 Probeset conjugated to AlexaFluor 568 (40 tests / 100 tests)

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C57Bl/6 mouse peritoneal exudate cells were incubated with Anti-Mouse CD16/CD32 Purified (cat. 14-0161) and Normal Mouse Serum (cat. 24-5544) to block Fc receptors, and then surface stained with Anti-Mouse F4/80 Antigen eFluor 450 (cat. 48-4801) and Anti-Mouse CD11b PE-Cyanine7 (cat. 25-0112) (right). Subsequently, the cells were fixed with the PrimeFlow microRNA Pretreatment Buffer (cat. 88-18006), then hybridized to Type 1 Mouse miR-146a Alexa Fluor 647 Target Probe Set (cat. VM1-10253) (purple histogram) using the PrimeFlow RNA Assay (cat. 88-18005). The no target probe control is shown in the blue histogram. F4/80 and CD11b double-positive cells were used for analysis.