Chemicon (ora parte del MerckMillipore) fornisce Apoptag^®, primo prodotto in assoluto sul mercato per la rilevazione della frammentazione del DNA in situ.
I Chemicon ApopTag^® Detection Kit offrono importanti vantaggi per il ricercatore:

• possibilità di visualizzare le singole cellule;
• stadio precoce e tardivo
• utilizzo sia su cellule sia su tessuto;
• test sensibile e semi-quantitativo;
• disponibilità sia della versione con perossidasi che di quella con fluorescenza;
• fluorescenza sia per microscopia sia per citofluorimetria;
• per doppie colorazioni o multi-marcature.

Oltre alla soluzione TUNEL standard è disponibile anche la linea ApopTag® ISOL, adatta a garantire una maggiore specificità.
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In alternativa al TUNEL, offriamo ai nostri Clienti anche soluzioni ssDNA anticorpo e ELISA da diversi fornitori.

Annexina V FITC - il sistema più semplice per la rivelazione di apoptosi

L’Annexina è una proteina che si lega alla fosfatidilserina rilasciata dalla membrana cellulare durante la prima fase di apoptosi, ancor prima che sia possibile rilevare la frammentazione del DNA. Grazie a tale caratteristica consente di rivelare lo stadio precoce di apoptosi e di distinguere l’apoptosi dalla necrosi in citofluorimetria o microscopia.

La distruzione del potenziale mitocondriale trans-membranico è uno dei primi eventi intracellulari che seguono l'induzione di apoptosi.

Il Kit MitoLight™ (disponibile in due versioni, da 25 e da 100 test) per la rivelazione di apoptosi utilizza un catione lipofilico, chiamato MitoLight™, come marcatore dell'attività mitocondriale. Il MitoLight™ si mostra in maniera differente nelle cellule normali e nelle cellule apoptotiche: nelle cellule sane, il colorante si accumula e si aggrega nel mitocondrio, mostrando una chiara fluorescenza rossa mentre nelle cellule apoptotiche con il potenziale della membrana mitocondriale alterato, il colorante resta nel citoplasma, mostrando fluorescenza verde.
Diviene quindi possibile discriminare facilmente tra cellule apoptotiche e non.
La visualizzazione può essere fatta con un microscopio a fluorescenza (band-pass filter per FITC e rodamina) oppure un citofluorimentro utilizzando il canale FITC per i monomeri verdi (Ex/Em = 510/527) ed il canale PI per gli aggregati rossi (Ex/Em = 585/590).

IHC Apoptosis Detection Kit è una valida soluzione per la rivelazione di apoptosi in immunoistochimica.

Il kit APO-BRDU-IHC™ si basa su un sistema di marcatura a due colori per identificare la frammentazione del DNA nelle cellule apoptotiche. I frammenti producono numerose code 3'-idossiliche che possono essere marcate con nucleotidi dUPT coniugati con bromuro. Un anticorpo anti-BddU coniugato con biotina si legherà quindi a queste code marcate. Seguirà un'incubazione con streptavidina coniugata HRP ed la frammentazione del DNA sarà visualizzata con DAB/H2O2/Urea.

Il kit può essere utilizzato su sezioni di tessuto paraffinato, sezioni criostatate e cellule fissate su vetrino.
Il kit include vetrini con controllo positivo e negativo.

La nostra offerta è molto vasta: caspase 9, sistema di rilevazione delle caspasi, inibitori, kit colorimetrici, fluorimetrici e chemiluminescenti per l’attività delle caspasi, etc.

CaspSCREEN kit per la rivelazione di apoptosi in citofluorimetria
L’attivazione delle proteasi e delle caspasi della famiglia ICE dà inizio all’apoptosi.
Il kit CaspSCREEN fornisce un sistema semplice per la rivelazione dell’attivazione delle caspasi nelle cellule intatte in citofluorimetria.
Utilizza un substrato che contiene due residui aspartati legati alla rodamina 110, substrato noto per le proteasi della famiglia delle caspasi. Il substrato coniugato con rodamina 100 non è fluorescente ma, dopo il clivaggio (taglio) da parte delle caspasi cellulari e delle proteasi legate all’apoptosi, la rodamina 110 sviluppa fluorescenza che può essere letta a 488-530 nm.
La rodamina 110 penetra meglio nelle cellule rispetto ad altri substrati e questo consente di misurare facilmente apoptosi anche in cellule intatte.

Inibitori delle caspasi
E' disponibile, a costi decisamente contenuti, un pannello completo per la rilevazione degli inibitori della caspasi.

Caspase Family Inhibitor Set: Sei diversi inibitori delle caspasi.

Attività delle caspasi
Kit colorimetrici, fluorimetrici e chemiluminescenti basati sulla rivelazione spettrofotometrica del cromoforo pNA (p-nitroanilide). Tale cromoforo è legato al substrato specifico per la caspase e viene liberato quando la caspase attiva taglia il substrato stesso.
L’assorbanza può essere misurata con lettore standard di micropiastre o con spettrofotometro. Il kit contiene, come standard per consentire la quantificazione dell’attività delle caspasi, un campione di pNA libero. E’ inoltre incluso un inibitore specifico per le caspasi.
Tale soluzione offre 2 particolari vantaggi:

• rapidità, con risultati disponibili in 2 ore;
• versatilità: possibilità di lavorare sia con tubi sia su micropiastra.

Caspase 9
L'apoptosi è coinvolta in diverse patologie ed è indotta da una famiglia di recettori di morte cellulare e dai loro ligandi. I segnali di morte cellulare sono trascritti da dominii contenenti membri della famiglia delle caspasi che fanno parte delle proteasi.
Un nuovo membro della famiglia delle caspasi è stato identificato recentemente e nominato  ICE-LAP6, Mch6, Apaf-3 e Caspase-9^1-3.  All'inizio dell'apoptosi il proenzima viene processato e forma la caspasi 9 attiva. La caspasi 9 attivata taglia ed attiva la caspasi 3 che è una delle proteine chiave responsabile del taglio proteolitico delle proteine che sono maggiormente coinvolte nell'apoptosi³. La caspasi-9 ha un ruolo centrale nella morte cellulare causata da un'ampia gamma di induttori tra cui  TNFa , TRAIL, anti-CD-95, FADD, e TRADD⁴. La caspase-9 è espressa su diversi tessuti umani^1,2.

Siamo in grado di offrirvi un'ampia gamma di strumenti per lo studio di questa nuova molecola, ad esempio:

 

Descrizione	Appl.	Forma	Origine	Quantità	Codice
Caspase 9 [ICE-LAP6; Mch6; Apaf-3] (Hu)	IB	Pur	Rabbit	100 µg	AB16969
Caspase-9 Recombinant Human Active	--	Pur	--	25 Units	CC120
Caspase-9 Colorimetric Proteinase Assay Kit	--	--	--	25 Assays	APT139

Referenze bibliografiche:
1. Duan, H. et al. (1996). J. Biol. Chem. 271: 16720-4.
2. Srinivasula, S.M. et al. (1996). J. Biol. Chem. 271: 27099-106.
3. Nijhawan, U.P. et al. (1997). J. Biol. Chem. 91: 479-89.
4. Pan, G. et al. (1998). J. Biol. Chem. 273: 5841-5.