cromatina upstate

L'immunoprecipitazione della Cromatina (ChIP) è un metodo ampiamente usato per identificare le proteine specifiche connesse con una regione del genoma, o al contrario, per identificare le regioni del genoma connesso con le proteine specifiche. Queste proteine possono essere isoforme degli istoni modificati ad un amminoacido particolare o ad altre proteine associate alla cromatina. Quando viene utilizzato con gli anticorpi che riconoscono le modifiche dell'istone, il ChIP può essere usato "per misurare" la quantità della modifica. Un esempio è la misura della quantità di acetilazione dell'istone H3 connessa con una regione specifica del promotore del gene nelle varie circostanze che potrebbero alterare l'espressione del gene. Gli istoni non sono le uniche proteine che possano essere studiate usando questa tecnica. Gran parte dell'interesse recente è focalizzato anche nell'analisi della distribuzione dei fattori di trascrizione.

L'utilizzo del ChIP prevede che le cellule siano inizialmente fissate con formaldeide per effettuare il crosslink del DNA e poi la Cromatina viene raccolta dalle cellule e sottoposta ad un processo di immunoselezione, che richiede l'uso degli anticorpi specifici.
Tutte le sequenze del DNA unite con crosslink alla proteina di interesse coprecipiteranno come componente del complesso della cromatina.
Dopo l' immunoselezione dei frammenti di cromatina e purificazione di quelli associati a DNA, la rivelazione delle sequenze di DNA specifiche viene svolta. Se il DNA che sarà rilevato è associato alla modifica dell'istone o della proteina che è esaminata, la rappresentazione relativa di quella sequenza del DNA sarà aumentata (o sarà arricchita) tramite il processo di immunoprecipitazione. Solitamente una PCR standard è effettuata per identificare la sequenza del DNA (il gene o la regione del genoma) connessa con la proteina di interesse.

Prodotti disponibili dal catalogo Upstate

EZ-ChIP™ : il kit contiene tutti i tamponi e i reagenti necessari per l'esecuzione del test ChIP da cellule di mammifero.

Caratteristiche e Benefici:
Semplice: Le colonnine, incluse nella confezione, garantiscono un eccellente purificazione del DNA- NON richiede estrazione con fenolo-cloroformio.
Veloce: Tutti i reagenti necessari per i campioni sono inclusi nel kit-NESSUNA perdita di tempo e denaro alla ricerca dei prodotti.
Ottima Riproducibilità: Gli anticorpi di controllo (positivi e negativi) e i primers di PCR sono inclusi per contribuire a convalidare i vostri risultati ed assicurarsi che il dosaggio sia stato effettuato correttamente.

Formato Kit : 22 dosaggi chromatin immunoprecipitation; Aplicazioni testate: chromatin IP

Componenti del Kit :
- DNA Purification Spin Columns e provette
- Protein G Agarose / Salmon Sperm DNA
- Anti-RNA Polymerase II, clone CTD448
- Control PCR Primers
- Normal Mouse IgG
- Reagenti di legame, lavaggio e eluizione
- Protease Inhibitor Cocktail II
- RNase A
- Proteinase K
- Tutti i tamponi neccessari

sono inoltre disponibili i seguenti kit ChIP:

17-295    Chromatin IP (ChIP) Assay Kit
16-157    Protein A agarose / Salmon Sperm DNA
16-202    Protein G Agarose / Salmon Sperm DNA
17-245    Acetyl-Histone H3 IP (ChIP) Assay Kit
17-229    Acetyl-Histone H4 IP (ChIP) Assay Kit

lista completa di tutti i prodotti ChIP: